Influência das condições da cultura no crescimento da Escherichia Coli

O uso de E. coli para produzir medicamentos é um método biológico. Ou seja, o uso de tecnologia de bioengenharia para transferir genes estranhos para E. coli, fermentação e cultura para expressão, centrifugação para coletar as bactérias e, em seguida, usar uma solução específica para quebrar as bactérias e coletá-las. A proteína alvo é transformada em medicamento após algum processamento subsequente.

1. temperatura da cultura

Experimentos mostram que a temperatura de cultura ideal está dentro da faixa de 35 ~ 40 °C, e a densidade celular aumenta com o aumento da temperatura, o que é consistente com as características gerais de crescimento de E. coli. No entanto, a taxa de crescimento é mais rápida em 37 °C ~ 38 °C, e o crescimento subsequente é relativamente plano. Combinando as características gerais da cultura de E. coli e a influência cruzada da temperatura e outros fatores de influência, a temperatura da cultura foi fixada em 37,5 ° C no experimento.

2. valor de pH

Após a cultura de E. coli para 18h com valores de pH diferentes, os resultados do teste mostram que o valor de pH de 8,0 não tem efeito significativo na densidade celular, e o valor do pH é muito baixo ou muito alto para alcançar bons resultados. Quando o valor de pH é 7,5, a densidade celular é relativamente mais alta e seu OD600nm atinge 3,25.

3. a influência do oxigênio dissolvido no crescimento de bactérias

De acordo com o índice de oxigênio dissolvido diferente no fermentador, a densidade celular do sistema de fermentação quando cultivado por 18 horas foi obtida. Os resultados experimentais mostram que a densidade celular aumenta continuamente com o aumento do índice de oxigênio dissolvido, mas a densidade celular aumenta lentamente após 50%.

4. influência da quantidade de inoculação

Otimizar diferentes quantidades de inoculação pode ter um impacto maior no crescimento de bactérias. Com 3% a 4%, o estado de crescimento das bactérias é melhor do que o de quantidades de inoculação muito baixas ou altas. Quantidades de inoculação muito baixas tornarão o crescimento de bactérias muito lento. Uma quantidade muito alta de inóculo consumirá uma grande quantidade de nutrientes no estágio inicial e causará um desperdício de cepas de sementes, portanto, uma quantidade de inóculo de 4% foi usada no experimento.

5. Determinação do tempo de cultura

Os resultados experimentais de diferentes tempos de incubação mostraram que as bactérias aumentaram em múltiplos de 12 para 18 horas e depois cresceram lentamente. Mostra que, no estágio posterior do crescimento exponencial, a energia das bactérias não é adequada para a reprodução em massa, mas é afetada pelos metabólitos. Portanto, para encurtar o ciclo de crescimento, a colheita de bactérias deve estar no período de crescimento exponencial tardio, ou seja, 18h.

6. determinação da velocidade

A velocidade da incubadora de agitação aumenta com o aumento do oxigênio dissolvido e a densidade da célula aumenta de acordo. A taxa de crescimento da densidade da célula é mais rápida em 100 ~ 200r/min, e relativamente lenta em 200 ~ 300r/min, indicando que a velocidade de 200r/min já pode promover a dissolução do oxigênio no ar. Tendo em conta que o aumento da velocidade pode produzir efeitos adversos, como espuma, de modo que a melhor velocidade adotada no teste é 200r/min.

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